Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中不断扩展

从第一次注意到口内自身免疫到注意到1改型高血压临床病症的的工业发展不下在学龄前时期就有很好的详细描述，多个口内自身免疫特征性的学龄前中会有70%在血清转换后10年内中风高血压，而随访15年的学龄前这一比不下减小到84%。比起，占临床1改型高血压一半以上的改型1改型高血压的患病机制还没有受益更好的研究课题。

越来越多的人开始运用于再行种系统来定义1改型高血压的的工业发展：群锥体在注意到多种口内自身免疫时进入第1下一阶段，注意到血糖精神状态时进入第2下一阶段，注意到病症时进入第3下一阶段。一些多发口内自身免疫特征性的群锥体，在1期和2期，的工业发展较快，并工业发展为患病的1改型高血压。我们之后详细描述了一组在首次检验到多种口内自身免疫抽取后至多于10年无高血压的变快的工业发展者，这组病患者人数多于，但特征非常明确。随后，我们发现口内自身淋巴细胞特异性CD8+T肝细胞重排在的工业发展减快的病患者中会基本不存在，但在更进一步患病和或多或少的高血压病患者中会很不易检验到。这显然得出结论，与的工业发展病患者相对于，这些病患者自身炎症的调节增强。

早期研究课题得出结论，尽管调节性T肝细胞(Treg)数量正常，但高血压病患者存在一些功能缺陷，其中会仅限于对IL-2的重排能力降低。此外，高血压病患者中会的现象CD4+T肝细胞显然对调节突显抵抗性，显出为现象T肝细胞的诱导减弱，纯净激发的Treg和锥体外激发的诱导Treg，以及淋巴细胞经历的CD4+T肝细胞中会IL-2重排减弱。本研究课题的目的是详细描述了CD4+调节性T肝细胞(Treg)在一小群极减快的工业发展者中会的特征，他们的平均岁数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

作法：BOX研究课题是一项以人群为基础的纵向研究课题，在21岁以下确诊的病患者直系亲属中会检查1改型高血压的危险因素。我们之后详细描述了长期减快的工业发展者的特征，他们保持多重口内自身免疫特征性超过10年，但没有注意到高血压的临床病症，快性或非透过性自身免疫。随后，10名继续保持无高血压并愿意给予大量血浆抽取的减快的工业发展者纳入T和B肝细胞功能分析。在目前的研究课题中会，8名快的工业发展者(SP组)，中会位岁数43岁(31-72岁)，18 - 32岁两者之间的口内自身免疫特征性。所有的组织者都所处1改型高血压的工业发展的1期，尽管一些人随后失去了口内自身免疫对某些淋巴细胞的特征性重排，然而，一名病患者已经所处2期至多于6年，但没有注意到临床病症，一名病患者被诊断为高血压，该受试者72岁，在热带植物实验抽取时，其HbA1c上升时到53 mmol/mol(7%)，在分析中会对该小分子透过了单独风险评估。转化外周血单个核肝细胞(PBMCs)，采用多给定流式肝细胞术和T肝细胞诱导试验中会风险评估小分子中会Treg的基频、表改型和功能。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)透过无监督聚类分析，风险评估Treg表改型。

结果：与卫生小分子相对于，来自快的工业发展锥体的无意识CD4+T肝细胞的监督聚类推断，激活的无意识CD4+ Treg基频减小，与组胺诱导的TNFR之外蛋白(GITR)强调减小有关。一名HbA1c上升时的病患者与的工业发展减快者和匹配的对照组相对于，Treg谱大同小异。功能分析得出结论，与卫生小分子相对于，来自减快的工业发展锥体的Treg肝细胞内的CD4+现象T肝细胞诱导明显损伤。显出为对现象CD4+T肝细胞CD25和CD134强调的诱导减小。

示意图1 深入的表改型分析推断，CD4+Treg亚改型在快的工业发展队列中会减小。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有小分子的活CD4+CD45RA -肝细胞上。根据上面物强调鉴定出10个元簇:无意识T肝细胞_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T肝细胞;HLA-DR + GITR +无意识T肝细胞;线或程Treg_1;线或程Treg_2;线或程Treg_3;和线或程Treg_4。(a)运用于9个不同Treg上面生成的10个元簇的MST。每个端口象征性一个战略性(100个战略性)，很大的元战略性(10个元战略性)在端口组周围成品。每个端口中会的甜品示意图回应单个上面的强调级别。(b)每个元聚类的热示意图，以推断整锥体上面强调。(c, d)为HD组(c)和SP组(d)生成示意图，以及FlowSOM识别系统的每个元簇的覆盖层。(e-l)一般来说核素为每个metacluster箱线或示意图(核素> 0.05%)具锥体为HD和SP组:线或程Treg_2 (e),线或程Treg_3 (f),线或程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T肝细胞(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T肝细胞(l)。黄色边框象征性**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 运用于CITRUS的预测模改型证实，Treg基频的减小是的工业发展减快的标识。分级门控(a - f)和柑橘分析(g-k)比起SP组织者和匹配的HD组织者在CD4+CD45RA−T肝细胞上的差异。(a)表型CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群锥体的象征性性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR强调透过转化，模拟FlowSOM群锥体。(b) HD(黑点)和SP(白点)组以及小分子SP 606(黄色)中会CD25+ cd127的基频汇总示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的箱线或示意图;(c) HLA-DRloGITR−(线或程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(线或程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(线或程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+线或程T cell)。(g - i)玉米簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3强调强度填充，斜线显眼的簇被识别系统为SP和HD队列两者之间的不同。(j)箱线或示意图推断了在SP(白点)和HD(灰点)组中会，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的一般来说核素(比不下)。(k)缩放推断每个簇的表改型(粉红色)和Treg上面一般来说强调与历史背景强调(蓝色);上列，线或程Treg_3;下面一行，线或程Treg_4。历史背景与所有其他簇中会上面的强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

示意图3 与卫生献血者相对于，的工业发展减快者无意识treg的GITR减小。每个无意识CD4+T肝细胞元簇(无意识T肝细胞_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T肝细胞;HLA-DR + GITR +无意识T肝细胞;线或程Treg_2;线或程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检验每个强调上面的发生变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的强调热示意图(sp606不仅限于在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR强调串联，推断缩放(c)和汇总示意图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(黄色)所有小分子仅限于，p< 0.05(蓝色)小分子SP 606和匹配的HD不仅限于在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR强调，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(黄色)串联，推断缩放(e)和汇总示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

示意图4 来自减快的工业发展的CD4+ treg肝细胞控制现象CD4+T肝细胞的能力降低。SP组用蓝色的线或和边框回应，HD组用黑色的线或和边框回应，黄色的线或/边框回应小分子sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞透过分选。CD4+CD25−(应答者)被上面为CFSE, Treg按判读的比不下滴定。用抗CD3 /28微珠再造肝细胞，培育3天后透过流式肝细胞术检验。(a-d)与CD4+应答者一般来说应的treg培育(免疫)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应答者培育。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE诱导百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱导百分比。运用于特征性对照(激活的响应肝细胞不含treg)量化诱导百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起测试

示意图5 现象CD4+T肝细胞对减快的工业发展的T肝细胞再造的诱导更引人注目。SP组用蓝色的线或和边框回应，HD组用黑色的线或和边框回应，黄色的线或/边框回应小分子sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞透过分选。CD4+CD25−(应答者)被cfsel上面，treg按判读的比不下滴定。用抗CD3 /28微珠再造肝细胞，培育3天后透过流式肝细胞术(CD25反染)和肝诱导分析。HD Treg与HD、SP或sp606应答者共同培育。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE诱导百分不下(b)。(c,d) CD25诱导百分不下(c)和CD134诱导百分不下(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育中会的强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起测试

结论：我们得出的结论是，来自减快的工业发展子的再造无意识CD4+Treg在GITR强调中会受益了扩展到和丰富，强调了进一步研究课题Treg在1改型高血压风险群锥体中会的系统性的必要性。

原文典故：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28